Spargerea barierei bucale（4）

Descoperirea și derivatizarea peptidei ciclice PTG-200
Descoperirea lui PTG-200

În 2016, Protagonist a dezvăluit un brevet (WO2016011208) pentru un inhibitor de polipeptidă oral care vizează IL-23R, care includea mai multe secvențe de peptide liniare și ciclice capabile să se lege la IL-23R. În special, secvențele prezentate în Tabelul 3A al acestui brevet seamănă îndeaproape cu structurile obținute anterior prin MDL prin afișarea fagilor. Secvențele de peptide liniare enumerate conțin în principal structura de bază -WQDYW- (așa cum se arată în figura de mai jos). Dintre acestea, cea mai puternică moleculă (SECV ID NR.4) a atins o concentrație inhibitoare a IL-23R de 4,1 pM, cu structura sa formată prin acetilarea capătului N-terminal al peptidei MDL 23.15.
Merită menționat că MDL și Protagonist au negociat odată o colaborare cu privire la peptida IL-23R în 2014, timp în care MDL și-a împărtășit informațiile de cercetare. În 2015, cele două părți au semnat un acord de confidențialitate, dar negocierile au fost încheiate în octombrie același an. Documentele juridice ulterioare au relevat că MDL a intentat un proces împotriva Protagonist la Tribunalul Districtual al SUA, pretinzând încălcarea brevetului de către PTG-200, implicând brevetele US 8946150 (MDL) și US 9624268 (Protagonist). În 2018, cererea MDL de încălcare a brevetelor a fost respinsă deoarece Protagonist a folosit aceste peptide pentru a dezvolta medicamente aprobate de FDA pentru boli autoimune, care au fost protejate de regula port sigur.

Revenind la punctul central al acestui articol, Protagonist a păstrat structura de bază - WQDYW propusă de MDL în modificările moleculare ulterioare, dar a adoptat diferite modele în strategia de ciclizare. Ei au introdus un Cys în secvența de bază pentru a forma o structură conservată - CXX-WQCYW - (cum ar fi - CQTWQCYW -) și au derivat sute de peptide în jurul acestei structuri, crescând activitatea la niveluri nanomolare (așa cum se arată în diagrama de mai jos). În plus, Protagonist a încercat, de asemenea, diferite metode de ciclizare, inclusiv introducerea unei legături tioeter între două situsuri Cys, folosind reacția de metateză a olefinelor (RCM) și implementarea strategiilor de ciclizare a legăturii amidice. Cu toate acestea, rezultatele experimentale indică faptul că peptidele ciclice prin legături disulfură sau tioeter prezintă, în general, o activitate mai bună decât peptidele ciclice prin legături RCM sau amidă.

Datele PK ale PTG-200 (compus C) sunt dezvăluite în brevet: după administrarea orală la șobolani la o doză de 20 mg/kg, compusul este distribuit în principal în țesutul gastrointestinal, cu expunere sistemică extrem de scăzută. Dintre acestea, ASC a mucoasei intestinale subțiri este de 355 μ g · h/g, iar cea a mucoasei colonului este de 77 μ ​​g · h/g. Cu toate acestea, ASC în plasmă este de numai 0,3 μ g · h/mL, cu o rată de recuperare de 40% în fecale. Acest compus prezintă o stabilitate bună în diferite fluide gastrointestinale și medii reducătoare: timpul de înjumătățire-săi este mai mare de 24 de ore în fluidul intestinal simulat (SIF), fluidul gastric simulat (SGF) și lichidul intestinal uman și, de asemenea, are un timp de înjumătățire de peste 2 ore în agentul reducător DTT. Rezultatele experimentului SPR au arătat că nu se leagă de IL-12R 1 singur, ci se poate lega la suprafața IL-23R și IL-12R 1/IL-23R co-exprimate, cu afinitate puternică și valori KD de 2,42 nM și, respectiv, 2,56 nM.

Derivat de PTG-200

În 2017, Protagonist a publicat cel de-al doilea brevet pentru inhibitorii peptidei IL-23R (WO2017011820). Acest brevet extinde scheletul primului brevet cu 227 secvențe derivate (SEQ ID NR.1030-1256) și introduce unități structurale pe peptida ciclică care pot prelungi timpul de înjumătățire in vivo (așa cum se arată în figura următoare). Studiile farmacocinetice au arătat că după administrarea orală a 10 mg/kg Peptide NO.1185 la șobolani, concentrația în plasmă este mult mai mică decât cea din probele de intestin subțire și colon, iar rata de recuperare în fecale ajunge la 20% după 24 de ore. Evaluarea siguranței a arătat că peptida NO.1185 nu a prezentat efecte inhibitoare asupra a 44 de ținte, inclusiv receptorii cuplati cu proteina G, transportori și canale ionice la 10 µM.

Ulterior, Protagonist a publicat mai multe brevete derivate bazate pe structurile PTG-200 sau Peptide NO.1185, care au optimizat în continuare activitatea și stabilitatea prin derivații structurale la diferite locuri de reziduuri. Detalii despre modificările aferente pot fi găsite în brevetele WO2018136646, WO2020014646, WO2021007433 și WO2021146458. În plus, Protagonist a solicitat, de asemenea, un brevet (WO2018022937) care acoperă un inhibitor peptidic ciclic IL-23R care conține 34 de aminoacizi, care nu va fi discutat în continuare în acest articol.